Page 90 - Наукові записки Державного природознавчого музею, 2025 Вип. 41

Зміни активності ферментів антиоксидантного захисту і вмісту ТБК … 89

1) – зона повного заповідання старовікових букових лісів Верещицького
природоохоронного науково-дослідного відділення (температура повітря 21-23 °С,
вологість повітря 33-35%, інтенсивність світла 40–50 тис. лк); 2) – територія вирубки
40-річного віку Страдчанського навчально-виробничого лісокомбінату (температура
повітря 28-30 °С, вологість повітря 20-22%, інтенсивність світла 80–90 тис. лк);
3) – зона стаціонарної рекреації «Верещиця» Яворівського національного природного
парку (температура повітря 26-28 °С, вологість повітря 26-28%, інтенсивність світла
90-100 тис. лк).
Активність каталази визначали після екстракції у 0,05 М трис-HCl буфері (рН 7,8).
Екстракт центрифугували протягом 15 хв за 5000 g. Активність фермента визначали у
надосадовій рідині спектрофотометрично на основі реакції з 4% розчином молібдату
амонію. Активність фермента виражали в мкМ Н2О2 на мг білка за хв (Белчгазі та ін.,
2023).
Для визначення активності пероксидази наважку рослинного матеріалу
гомогенізували в 0,1 М ацетатному буфері (рН 5,4) у співвідношенні 1:1, екстрагували
протягом 30 хв при кімнатній температурі та центрифугували 15 хв, 4000 об/хв.
Супернатант використовували як ферментний препарат. Для визначення активності
пероксидази 2 мл ферментного препарату змішували з 0,5% розчином бензидину та 0,1
М ацетатним буфером (рН 5,4). Якісну реакцію розпочинали внесенням 3% розчину
пероксиду водню. Через 5 хв проби фотометрували за довжини хвилі 412 нм.
Активність фермента визначали у відносних одиницях на 1 г сухої маси (Белчгазі та
ін., 2023).
Для визначення активності СОД рослинний матеріал екстрагували протягом 30 хв
у 0,15 М фосфатному буфері (рН 7,8). Супернатант, отриманий після центрифугування
(10 хв, 5000 g), додавали до інкубаційного середовища, що містило 0,33 мМ ЕДТА, 0,4
мМ нітросиній тетразолій, 0,01 мМ феназинметасульфат та 0,8 мМ НАДФН. Оптичну
густину розчину вимірювали спектрофотометрично за довжини хвилі 540 нм.
Активність СОД виражали в умовних одиницях на мг білка за хв (Белчгазі та ін., 2023).
Вміст ТБК-активних сполук визначали спектрофотометричним методом на
спектрофотометрі Specord 210 Plus за довжини хвилі 532 нм (Мусієнко та ін., 2001).
Отримані дані опрацьовували методами статистичного аналізу з використанням
пакету програмного забезпечення Microsoft Excel.

Результати дослідження та їх обговорення

Досліджували активність ферментів антиоксидантного захисту СОД, пероксидази
і каталази у клітинах гаметофорів лісових видів мохів Atrichum undulatum і
Plagiomnium еlatum залежно від водно-температурного режиму їх місцевиростань.
Ключовим ферментом, задіяним в процесі детоксикації АФК, є СОД,. Вперше ензим
досліджений J.M. McCord і I. Fridovich у 1969 р. (McCord & Fridovich, 1969), він
каталізує перетворення супероксиду на пероксид водню і молекулярний кисень. СОД
є одним із маркерних ферментів, який практично першим активується у відповідь на
стрес (Зинь, 2012; Khan et al., 2017).
Активність СОД у гаметофорах мохів із дослідних ділянок у старовіковому
буковому лісі була найменшою і змінювалась в межах 1,82–1,99 відн. од./хв мг/білка.
Найвищий вміст ферменту відзначено у зразках Atrichum undulatum з дослідних
ділянок на території вирубки, що в 1,47 і 1,78 рази перевищувало активність ферменту